酶反应中的恒pH滴定
发布时间：
2025-06-10 14:26
关键词：检测
一、应用领域
酶持续反应，导致体系pH变大或者变小，一般要求加酸或加碱来平衡环境，使体系处在相对稳定的pH范围，常用于酶动力学研究、蛋白质等电点测定、微生物代谢产物的分析。
二、方法原理
恒pH滴定是通过电位法实时监测溶液pH值的变化，自动调节滴定剂流速以维持设定pH值，直至反应终点。
三、实验仪器及推荐配置
雷磁ZDJ-5D型自动电位滴定仪/ZDJ-5B型自动电位滴定仪
电极配置1：雷磁982201常规pH滴定电极
电极配置2：雷磁E-201F型pH电极、E-301F型pH电极等常规pH复合电极
四、滴定类型和方法
滴定类型：恒pH滴定
滴定方法：设置如下
滴定模式 | 恒pH滴定模式 | |
终点设置 | 终点个数 | 1 |
滴定速度 | 慢速 | |
平衡值 | 1mV | |
平衡时间 | 3s | |
最大等待时间 | 10s | |
预设终点 | 6.5pH | |
预控点 | 7.5pH | |
预控比例 | 30% | |
添加控制 | 预加体积 | 0.00mL |
预加延时 | 10s | |
添加方式 | 按预控比例添加 | |
最小添加体积 | 0.02mL | |
最大添加体积 | 999mL | |
搅拌器设置 | 搅拌类型 | 下搅拌 |
搅拌速度 | 30rpm | |
滴定前搅拌时间 | 10s | |
五、实验试剂
0.1mol/L氢氧化钠溶液
称取110g氢氧化钠，溶于100mL无二氧化碳的水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮，量取上层溶液5.4mL，用无二氧化碳的水稀释至1000mL，摇匀。
0.1mol/L盐酸滴定溶液
移取8.7mL浓盐酸溶液，加纯水稀释定容至1000mL，制得0.1mol/L盐酸滴定溶液。
饱和氯化钾溶液
在25℃环境下，称取40g左右的氯化钾倒入烧杯中，加入约 100ml蒸馏水，充分搅拌，取上清液。
六、样品分析及结果计算
移取适量的样品如0.1mol/L NaOH溶液于烧杯内，用去离子水进行定容
放入搅拌子后，将以上测试溶液置于滴定台上
插入电极，启动滴定
七、滴定结果
滴定24小时后，滴定图谱如下：
截取部分数据如下：
八、注意事项
使用雷磁ZDJ-5D进行恒pH滴定，仪器支持保存1000个测定结果；使用雷磁ZDJ-5B进行恒pH滴定，仪器支持保存200个测定结果，每次保存至200个结果后，会自动进行覆盖；
废液处理前请进行妥善处置。
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